ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЙ МЕТОД КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ДЕЗИНФЕКЦИИ
Для контроля качества аэрозольной дезинфекции Ю. И. Боченин, А. А. Закомырдин
(1981) разработали физико-химический (линейно-колористический) метод. В его
основу положено определение содержания действующего вещества, обнаруживаемого
в воздухе помещений и на поверхности после применения дезинфицирующего средства.
Метод позволяет дать оценку эффективности проведенной дезинфекции сразу же по
истечении экспозиции обеззараживания.
Для проведения контроля готовят, индикаторные пробирки диаметром 5—6 мм, длиной
40—50 мм, которые заполняют расплавленной индикаторной средой и запечатывают
расплавленным парафином. В качестве индикаторной среды используют среду Эндо
и сульфитную среду. Срок годности индикаторных пробирок 1 мес при условии хранения
их при температуре 0—5 °С.
Среду Эндо готовят следующим образом: 2%-ную взвесь среды на дистиллированной
воде доводят до кипения, фильтруют через ватный фильтр и разливают в пробирки;
среда имеет желтоватый цвет, но при контакте с парами формальдегида она приобретает
красновато-фиолетовый оттенок.
Подготовка сульфитной среды: 2% агар-агара расплавляют в дистиллированной воде,
добавляют 1 % сульфита натрия и 1% фенолфталеина (1%-ного спиртового раствора).
Среда приобретает малиновую окраску. После этого добавляют 0,1— 0,2% 0,1 н.
раствора серной кислоты. Среду разливают по пробиркам. Под воздействием формальдегида
среда окрашивается в малиновый цвет.
Перед проведением дезинфекции индикаторные пробирки (предварительно освобожденные
от парафина) размещают на полу открытым концом вверх, на потолке открытым концом
вниз и на стенах — горизонтально. Эффективность обеззараживания определяют по
глубине окрашивания индикаторной среды, начиная с верхнего обреза. Дезинфекция
считается эффективной, если глубина окрашивания среды будет не менее 18 мм после
12-часовой экспозиции и не менее 26 мм после 24-часовой экспозиции.
САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ДЕЗИНФЕКЦИИ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПРОМЫВКИ ТРАНСПОРТНЫХ СРЕДСТВ
Промывка транспортных средств должна осуществляться водой с температурой не
ниже 60 °С, давлением не менее 2атм у промываемой стенки. После проверки соответствия
указанных критериев оценивают степень чистоты. Поверхность считается чистой
и подготовленной для последующей дезинфекции в достаточной мере, если на всем
ее протяжении можно распознать свойства очищаемого материала (структуру поверхности
и цвет, рисунок доски и пр.), кроме того, в стекающей промывной воде должно
отсутствовать помутнение.
Собственно микробиологический контроль предназначен для определения качества
очистки и промывки транспортных средств I категории после перевозки в них животных,
сырья и продуктов животного происхождения.
Принцип метода заключается в установлении степени снижения общей бактериальной
обсемененности поверхностей после проведения ветеринарно-санитарной обработки
с помощью проведения посевов на питательные среды (Цариков, 1986).
Подготовка к исследованиям. В пробирках готовят стерильный физиологический раствор
по 9 мл; на каждую исследуемую пробу (смыв с поверхности) необходимо иметь 6—8
пробирок со стерильным физиологическим раствором.
Порядок исследований. В вагоне (трюме судна, грузовом отсеке самолета) после
механической очистки перед началом проведения промывки отбирают пробы-смывы
из пяти различных поверхностей (пол, стены). Смывы берут тщательным протиранием
поверхности, ограниченной трафаретом, размером 10x10 см увлажненным ватно-марлевым
тампоном. В течение 10 мин тампон отмывают в 10 мл стерильного физиологическо¬го
раствора. Затем 1 мл полученной взвеси стерильной пипеткой переносят в пробирку
с 9 мл стерильного физиологического раствора. После тщательного перемешивания
готовят серийные разведения, для каждого разведения используя отдельную стерильную
пипетку.
Суспензию в питательную среду высевают поверхностным или глубинным способом.
Поверхностный способ. На поверхность твердой питательной среды из трех последних
разведений стерильной пипеткой наносят суспензию по 0,5 мл и равномерно распределяют
ее, из каждого разведения делают параллельно два высева. После посева чашки
Петри помещают в термостат крышками вниз; инкубация проходит при 37 °С в течение
24 ч.
Глубинный способ. В чашку Петри вносят по 1 мл из каждого разведения и заливают
10—15 мл расплавленного и остуженного до 45 °С питательного агара, затем агар
и посевной материал тщательно перемешивают. Инкубацию посевов проводят аналогично
вышеуказанному способу.
Для контроля одновременно проводят посев воды, используемой для промывки, взятой
непосредственно у сопла брандспойта.
По окончании промывки поверхности обследуемого объекта аналогичным способом
берут пробы-смывы и также проводят исследования.
Учет результатов. По истечении срока инкубации посевов подсчитывают
выросшие колонии, не открывая чашки Петри. Для этого используют специальный
счетчик для подсчета числа колоний микроорганизмов. Учитывают результаты только
на тех чашках, где число колоний не превышает 300. Результаты параллельных высевов
из одного разведения суммируют и определяют среднее число. Количество клеток
на 1 см2 поверхности исследуемого транспортного средства вычисляют по формуле
M= а10n/у*100
где М — количество клеток на 1 см2 поверхности; а — среднее число колоний при
высеве данного разведения; 10 — коэффициент разведения; n — порядковый номер
разведения; у — объем суспензии, взятой для посева в мл; 100 — площадь поверхности,
с которой взята проба-смыв.
Оценка качества промывки. Если в результате проведения тщательной промывки транспортного
средства достигается снижение общей бактериальной обсемененности его поверхностей
на 85% и более, то проведенная промывка признается удов¬летворительной. Если
снижение бактериальной обсемененности менее чем на 85%, промывка признается
неудовлетворительной.
В контрольных посевах (пробы воды, взятой у сопла брандспойта) общая бактериальная
обсемененность не должна превышать установленных стандартов (100 микробных тел
в1 мл воды).
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ДЕЗИНФЕКЦИИ
Метод предназначен для контроля качества проведенной дезинфекции транспортных
средств II и III категорий после перевозки животных, продуктов и сырья животного
происхождения.
Стафилококки на внутренних поверхностях транспортных средств обнаруживают не
во всех случаях. Так, обсемененность изотермических вагонов Бактериями золотистого
стафилококка составляет 30—47,5% случаев; скотских вагонов — 50,9— 76,3% (Бутко,
Шалуев, Цариков, 1980—1985). По данным Е. И. Леоновой (1984), стафилококки на
поверхностях вагонов после перевозки мяса присутствуют в 47,5% случаев. В. anhtracoides
на указанных объектах не обнаруживается. Поэтому контроль качества дезинфекции
транспортных средств должен осуществляться с использованием тест-культур.
Качество дезинфекции устанавливают по выделению с поверхности тест-объектов
золотистого стафилококка для II категории и антракоида для III категории транспортных
средств.
Контроль качества дезинфекции осуществляется периодически, но не менее 2—3 раз
в месяц, а также при возникновении необходимости и по требованию ветеринарной
и санитарной служб. Исследование проводят в объеме 3—5% транспортных средств
от суточной нормы их обработки.
Перед дезинфекцией транспортных средств в них закладывают деревянные тесты (по
3 на каждый объект: пол, стены и потолок) или с помощью трафаретов на поверхностях
очерчивают квадраты размером 10x10 см, которые контаминируют суточной культурой
золотистого стафилококка (при дезинфекции по II категории) и 7-суточной культурой
антракоида при спорообразовании не менее 90% (для дезинфекции по III категории).
Культуры наносят из расчета 20 млн. микробных клеток на 1 см поверхности. В
качестве белковой нагрузки (при закладке тест-объектов) используют 0,3 г стерильного
навоза на 100 см2 поверхности или 1 мл сыворотки крупного рогатого скота.
По истечении экспозиции дезинфекции и времени нейтрализации с поверхности тест-объекта
или поверхности транспортного средства отбирают пробы тщательным протиранием
стерильными ватными тампонами, предварительно смоченными в стерильной воде.
Тампоны (каждый в отдельности) отмывают во флаконе с 10—20 мл стерильной воды:
несколько раз погружают и отжимают. Отжатые тампоны удаляют, а жидкость центрифугируют
при 3000—3500 об/мин в течение 20—30 мин. После этого надосадочную жидкость
сливают, а из центрифугата делают посевы на соответствующие среды.
Для индикации золотистого стафилококка высевают по 0,5 мл центрифугата в 5 мл
50%-ного сахарозного мясопептонного бульона (МПБ). Через 24 ч инкубирования
в термостате при 37 °С делают пересев петлей на 8,5%-ный солевой мясо-пептонный
агар (МПА). Посевы выдерживают в термостате 24 ч при температуре 37 °С.
Для индикации антракоида центрифугат высевают одновременно на МПА и МПБ. Посевы
выдерживают в термостате 7 сут (при температуре 37°С).
При испытании новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики посевы
помещают в термостат; при 37°С (Дудницкий, 1986). Результаты учитывают при работе
с кишечной палочкой; золотистым стафилококком и антракоидом через 24 ч (ориентировочно)
и 7 сут. При наличии роста на МПБ делают подтверждающий посев на плотные среды
(Эндо и МПА).
Проведенная дезинфекция признается удовлетворительной, если нет роста тест-микробов
во всех исследованных пробах при наличии роста в посевах с контрольных тест-объектов.
С целью сокращения времени разработаны ускоренные методы контроля качества дезинфекции
транспортных средств.
МЕТОД УСКОРЕННОГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ДЕЗИНФЕКЦИИ ТРАНСПОРТНЫХ СРЕДСТВ ПРИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ
И ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЯХ
Метод предназначен для контроля качества дезинфекции транспортных средств II
категории после перевозки в них животных, сырья и продуктов животного происхождения.
Принцип метода — выявление жизнеспособных клеток золотистого стафилококка в
микрокультуре на дрожжевой среде люминесцентно-микроскопическим исследованием.
Ответ готов в течение 6—7 ч (Цариков, 1984).
Микроорганизмы, используемые в качестве тест-культуры, и предъявляемые к ним
требования. В качестве тест-культуры используют музейный штамм золотистого стафилококка
(St. aureus, штамм 209-Р), который обладает типичными морфологическими, биохимическими
и культуральными свойствами, а также устойчивостью к действию фенола (1:70)
не менее 20—25 мин и к хлорамину (0,2%) не менее 10 мин. Устойчивость рабочего
штамма тест-культуры проверяют не реже одного раза в месяц.
Музейные культуры хранят при температуре —4°С в виде сухой культуры в ампулах
(после лиофильной сушки) не более двух лет; в виде посевов на МПА (посев укол)
под слоем стерильного вазелинового масла (толщина слоя 1,5—3 мм) не более 6
мес.
Подготовка к исследованиям. Приготовление дрожжевого автолизата: 500 г прессованных
хлебных дрожжей разбавляют в 100 мл стерильной водопроводной воды до сметанообразной
консистенции, выдерживают при 50 °С 48 ч. Затем добавляют 700 мл стерильной
водопроводной воды и оставляют на 2— 7 сут при комнатной температуре, после
чего верхний слой сливают и фильтруют через фильтр Зейтца. Автолизат хранят
при 4°С (до 10 мес).
Состав дрожжевого агара: 1 л воды + 20 г сухого агара + 20 г глюкозы + 40 г
дрожжевого автолизата (рН 7). Среду разливают по пробиркам и стерилизуют при
0,5 атм в течение 20 мин.
Предметные стекла вначале промывают в мыльном растворе, затем ополаскивают водопроводной
водой, после чего выдерживают 30 мин в химически чистой серной кислоте, дополнительно
промывают водопроводной водой с последующей обработкой ректифицированным этиловым
спиртом в двух порциях по 2—3 с и подсушивают в сушильном шкафу. Затем стекла
по одному раскладывают в чашки Петри и стерилизуют. Стерилизации подвергают
также пробирки с ватно-марлевыми пробками, пипетки мерные и пастеровские и др.
Для приготовления растворов флюорохромов на аналитических весах отвешивают навески
по 100 мг аурамина и родамина. Каждую навеску красителя в отдельности растворяют
в 100 мл дистиллированной воды. Затем растворы фильтруют, сливают в темные флаконы
с притертыми пробками и хранят в темном месте. Срок использования концентрированных
растворов — 6 мес.
Для окрашивания препаратов готовят рабочие растворы: смешивают равные количества
аурамина и родамина, разведенного в 10 раз. Рабочие растворы флюорохромов используют
только свежеприготовленными.
Подготовка препаратов для подращивания микрокультур состоит в следующем. В день
проведения исследований дрожжевой агар наносят на предметные стекла. Для этого
пробирки с дрожжевым агаром погружают в кипящую воду, извлекая их сразу же после
разжижения среды. Расплавленную питательную среду, не остужая, пастеровской
пипеткой наносят равномерным слоем на 2/з поверхности предметного стекла, находящегося
в чашке Петри. Чашки Петри закрывают и выдерживают при комнатной температуре
для застывания агара в течение 15 мин. Затем чашки с приоткрытыми крышками помещают
в термостат при 37 °С на 10 мин для подсыхания. На каждую исследуемую пробу
(смывы с поверхности тест-объектов) готовят по два предметных стекла с дрожжевым
агаром (в том числе и для контрольных тест-объектов).
Для приготовления бактериальной взвеси суточную культуру рабочего штамма золотистого
стафилококка высевают в МПБ и выращивают в термостате при 37 °С в течение 18—
24 ч. Полученную бульонную культуру разводят МПБ до концентрации, соответствующей
по мутности бактериальному стандарту 2 млрд. микробных клеток в 1 мл бульона.
Деревянные и металлические тест-объекты моют водой с мылом и щеткой. После подсушивания
при комнатной температуре их заворачивают в плотную бумагу (каждый в отдельности)
и стерилизуют в автоклаве.
На стерильный тест-объект наносят 2 мл 2-миллиардной взвеси бульонной культуры
золотистого стафилококка, которую равномерно распределяют по поверхности стерильным
шпателем. Контаминированные тест-объекты подсушивают в стерильном боксе при
комнатной температуре 18—20°С и относительной влажности 50—60% в течение 60
мин и помещают их в стерильные биксы.
Порядок исследований. В промытый вагон (самолет, трюм) перед началом проведения
дезинфекции раскладывают по четыре контаминированных тест-объекта. По завершении
экспозиции обеззараживания тест-объекты собирают, аккуратно складывают в стерильные
биксы и переносят в лабораторию для исследования.
В бактериологическом боксе поверхность каждого тест-объекта тщательно протирают
слегка увлажненным стерильным тампоном, который затем отмывают в 10 мл стерильного
нейтрализующего раствора (по определенному дезинфицирующему средству) в течение
10 мин. После этого тампон отжимают о стенку пробирки и удаляют из нее, а жидкость
центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. По окончании центрифугирования
надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют 1 мл стерильной водопроводной
воды.
Контрольный тест-объект, не обеззараженный в вагоне (самолете, трюме), исследуют
аналогичным образом.
Одну каплю разведенного осадка наносят на предметное стекло с дрожжевым агаром
с равномерным распределением ее по поверхности агара. Готовят два параллельных
препарата, один из которых исследуют сразу же после посева без подращивания,
а другой помещают в термостат при 37 °С на 7 ч (для подращивания микроколоний).
Для предотвращения высыхания препаратов последние кладут в чашки Петри, куда
вносят несколько капель стерильной водопроводной воды.
Препараты просматривают под люминесцентным микроскопом, для этого их вначале
подсушивают на воздухе в течение 15 мин, а затем окрашивают аурамин-родамином.
Препараты окрашивают нанесением на поверхность среды с посевом пяти капель краски
(четыре из них по углам и одну в середину). Такое распределение красителя обеспечивает
окрашивание всего препарата.
После нанесения красителя препараты помещают в термостат до полного их подсыхания,
а затем исследуют под люминесцентным микроскопом через покровное стекло в синем
отраженном свете с использованием иммерсионной системы.
Оценка качества дезинфекции. При достижении полного обеззараживания в препаратах
после подращивания в поле зрения видны лишь единичные клетки золотистого стафилококка
— погибшие. Проведенная дезинфекция признается удовлетворительной.
При неполном обеззараживании в инкубированных препаратах при микроскопии наряду
с одиночными клетками выявляют микроколонии, возникшие в результате деления
жизнеспособных клеток золотистого стафилококка. Проведенная дезинфекция считается
неудовлетворительной.
В контроле (не обработанный дезинфектантом тест-объект) должен наблюдаться рост
культуры золотистого стафилококка.
МЕТОД УСКОРЕННОГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ДЕЗИНФЕКЦИИ ТРАНСПОРТНЫХ СРЕДСТВ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ,
ВЫЗВАННЫХ СПОРООБРАЗУЮЩИМИ МИКРОБАМИ
Метод основан на способности сапрофитного микроба антракоида обесцвечивать органические
краски и переводить их в бесцветные лейкосоединения за счет редуцирующих свойств
(Цариков, 1985; Бутко, Цариков, 1985).
Микроорганизмы, используемые в качестве тест-культуры, и предъявляемые к ним
требования. В качестве тест-культуры используют музейный штамм антракоида (Вас.
anthracoides, штамм 96) в споровой форме, который обладает типичными морфологическими,
биохимическими и культуральными свойствами, а также устойчивостью к действию
текучего пара с температурой 100°С в течение 6—7 мин и к хлорамину (10%) не
менее 6 ч.
Устойчивость рабочего штамма тест-культуры проверяют не реже одного раза в месяц.
Музейные культуры хранят при температуре —4°С в виде сухой культуры в ампулах
(после лиофильной сушки) не более двух лет; в виде посевов на МПА (посев укол)
под слоем стерильного вазелинового масла (толщина слоя 1,5—3 мм) не более 6
мес.
Подготовка к исследованиям. Приготовление дрожжевого автолизата: 500 г прессованных
хлебных дрожжей разбавляют в 100 мл стерильной водопроводной воды до сметанообразной
консистенции, выдерживают при 50 °С в течение 48 ч. Затем добавляют 700 мл стерильной
водопроводной воды и оставля¬ют на 2—7 сут при комнатной температуре, после
чего верхний слой сливают и фильтруют через фильтр Зейтца. Автолизат хранят
при 4°C (до 10 мес).
На каждую исследуемую пробу готовят по одной пробирке со средой. В день проведения
исследований в пробирки делают посевы на скошенный МПА. Посевы инкубируют при
37 °С в течение 48 ч, затем пробирки с выросшей культурой выдерживают 5—7 дн.
при комнатной температуре (10—18 °С) в затемненном месте.
Проверка на спорообразование состоит в следующем. По истечении указанного срока
готовят мазок из культуры, отобранной петлей с верхнего, среднего и нижнего
участков агарового косяка. Мазок фиксируют, окрашивают фуксином и микроскопируют,
просматривая не менее 10 полей зрения; количество спор должно составлять не
менее 90%.
Для приготовления бактериальной взвеси споровую культуру антракоида смывают
с агара стерильной водопроводной водой и разводят до концентрации, соответствующей
по мутности бактериальному стандарту 2 млрд. микробных клеток в 1 мл.
Деревянные и металлические тест-объекты моют водой с мылом и щеткой. После подсушивания
при комнатной температуре их заворачивают в плотную бумагу (каждый в отдельности)
и стерилизуют в автоклаве.
На стерильный тест-объект наносят 1 мл 2-миллиардной споровой взвеси антракоида
и 0,3 г сухого стерильного навоза крупного рогатого скота, равномерно распределяя
по поверхности стерильным шпателем. Контаминированные тест-объекты подсушивают
в стерильном боксе при комнатной температуре 19—20°С и относительной влажности
50—60% в течение 60 мин и помещают в стерильные биксы.
Порядок исследований. В вагон (самолет, трюм) перед началом проведения дезинфекции
раскладывают по пять контаминированных тест-объектов. По завершении экспозиции
обеззараживания тест-объекты собирают, аккуратно складывают в стерильные биксы
и переносят в лабораторию для исследования.
В бактериологическом боксе поверхность каждого тест-объекта тщательно протирают
слегка увлажненным стерильным тампоном, который затем отмывают в 10 мл стерильного
нейтрализующего раствора (по определенному дезинфицирующему средству) в течение
10 мин. После этого тампон отжимают о стенку пробирки и удаляют из нее, а жидкость
центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. По окончании центрифугирования
надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют 1 мл стерильной водопроводной
воды.
Контрольный тест-объект, не обеззараженный в вагоне, исследуют аналогичным образом.
Полученную взвесь высевают в МПБ с дрожжевым автолизатом и инкубируют при 37°С
в течение 16—17 ч.
По окончании срока доращивания в каждую пробирку добавляют по 1—2 капли 1%-ного
водного раствора индигокармина и помещают в термостат при температуре 37 °С
на 1,5 ч. По истечении указанного срока проводят учет результатов.
Оценка качества дезинфекции. При достижении полного обеззараживания в результате
гибели спор антракоида питательная среда с посевами прозрачная голубого цвета.
При пересеве на МПА рост тест-микроба отсутствует. Проведенная дезинфекция признается
удовлетворительной.
При неполном обеззараживании индикаторная среда в результате развития тест-микроба
обесцвечивается и приобретает исходный цвет, типичный для МПБ, на дне пробирок
накапливается хлопьевидный осадок. При пересеве культуры на МПА развиваются
колонии, типичные для антракоида. Проведенная дезинфекция признается неудовлетворительной.
В контрольных посевах (не обработанный дезинфектантом тест-объект) индикаторная
среда обесцвечивается, на дне пробирки накапливается хлопьевидный осадок. При
пересеве на МПА развиваются типичные колонии антракоида.
Ссылка на этот сайт (vetfac.narod.ru) обязательна.
Если вы не нашли здесь того, что искали, вы можете заказать реферат или контрольную работу на этом сайте. Все работы выполняются опытным преподавателем микробиологии и не копируются с сайтов рефератов. Все подробности можно узнать, пройдя по этой ссылке.
